ජාන අධ්‍යයනය කිරීමේ ක්‍රියාවලියේදී, අපට බොහෝ විට ප්‍රමාණවත් නොවන RNA සාම්පල හමු වේ, නිදසුනක් වශයෙන්, කුඩා ව්‍යුහ විද්‍යාත්මක මුඛ පිළිකා, තනි සෛල සාම්පල සහ මිනිස් සෛල තුළ ඉතා අඩු මට්ටමකින් පිටපත් කරන විශේෂිත ජාන විකෘතිවල සාම්පල අධ්‍යයනය කිරීම සඳහා.ඇත්ත වශයෙන්ම, COVID-19 පරීක්ෂණය සඳහා, ස්පුබ් නිවැරදි ස්ථානයේ නොමැති නම් හෝ නියැදීමේදී ප්‍රමාණවත් වේලාවක් නොමැති නම්, නියැදි ප්‍රමාණය ඉතා අඩු වනු ඇත, එබැවින් සෞඛ්‍ය හා පවුල් සැලසුම් කොමිෂන් සභාව දින දෙකකට පෙර එළියට පැමිණියේය. පරීක්ෂණය සමත් වූ අතර, න්යෂ්ටික අම්ල නියැදිකරු සාම්පල හයක් නොගත්තේ නම්, ඔබට එය වාර්තා කළ හැකිය.
ප්‍රතික්‍රියාකාරකයේ සංවේදිතාව වැදගත් වන්නේ අපට මෙම ගැටලුව හෝ එම ගැටලුව ඇති නිසා RT-PCR හි සංවේදීතාව වැඩි දියුණු කිරීමට අපට කුමක් කළ හැකිද?
හැකි විසඳුම් සාකච්ඡා කිරීමට පෙර, අප ඉහත සඳහන් කළ තත්වය සමඟ විශාල සංකූලතා දෙකක් සඳහන් කරමු.
පළමුවෙන්ම, අපගේ සාම්පලයේ සෛල ජනගහනය කිහිපයක් පමණක් ඇති විට RNA නැතිවීම ගැන අපි කනස්සල්ලට පත්ව සිටිමු.තීරු ක්‍රමය හෝ න්යෂ්ටික අම්ල වර්ෂාපතන ක්‍රමය වැනි සාම්ප්‍රදායික වෙන්කිරීම් සහ පිරිසිදු කිරීමේ ක්‍රම භාවිතා කරන්නේ නම්, සාම්පල කිහිපය අහිමි වීමේ වැඩි සම්භාවිතාවක් ඇත.එක් විසඳුමක් වන්නේ tRNA වැනි වාහක අණුවක් එකතු කිරීමයි, නමුත් එසේ වුවද, අපගේ ප්‍රතිසාධන අත්හදා බැලීම හරි බවට සහතිකයක් නොමැත.
ඉතින් වඩා හොඳ මාර්ගය කුමක්ද?සංස්කෘතික සෛල හෝ ක්ෂුද්‍ර ව්‍යුහ විද්‍යාත්මක සාම්පල සඳහා හොඳ විකල්පයක් වන්නේ සෘජු ලිසිස් භාවිතා කිරීමයි.
අදහස වන්නේ සෛල විනාඩි 5ක් බෙදීම, RNA ද්‍රාවණයට මුදා හැරීම, පසුව ප්‍රතික්‍රියාව විනාඩි 2ක් නතර කිරීම, ඉන්පසුව RNA නැති නොවන පරිදි ලයිසේට් සෘජුවම ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ ප්‍රතික්‍රියාවට එකතු කිරීම සහ අවසානයේ ලැබෙන cDNA කෙලින්ම දැමීමයි. තත්‍ය කාලීන ප්‍රතික්‍රියාව තුලට.
නමුත් සීමිත ආරම්භක ලක්ෂ්‍යයක් හෝ ඉලක්කගත ජාන ප්‍රකාශනයේ කුඩා ප්‍රමාණයක් නිසා, අපට සියලුම RNA ප්‍රතිචක්‍රීකරණය කළ හැකි අතර හොඳ තත්‍ය කාලීන සංඥාවක් ලබා ගැනීමට ප්‍රමාණවත් සැකිලි ලබා නොදෙන්නේ නම් කුමක් කළ යුතුද?
මෙම අවස්ථාවේදී, පූර්ව විස්තාරණ පියවර ඉතා ප්රයෝජනවත් විය හැකිය.
පහත දැක්වෙන්නේ ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමෙන් පසු සංවේදීතාව වැඩි කිරීමේ යෝජනා ක්‍රමයකි.ආරම්භ කිරීමට පෙර, පෙර-විස්තාරණය සඳහා මෙම ඉලක්ක සඳහා නිශ්චිත ප්‍රයිමර් සැලසුම් කිරීම සඳහා, අප උනන්දු වන්නේ කුමන ඉලක්ක ගැනද යන්න අපට පහළට ඇසීමට අවශ්‍ය වේ.
ප්‍රයිමර් යුගල 100ක් දක්වා මිශ්‍ර ප්‍රයිමරයක් සහ 10 සිට 14 ගුණයක ප්‍රතික්‍රියා චක්‍රයක් නිර්මාණය කිරීමෙන් මෙය සාක්ෂාත් කරගත හැකිය.එබැවින්, ලබාගත් cDNA පූර්ව වර්ධක කිරීම සඳහා මෙම අවශ්‍යතාවය සඳහා විශේෂයෙන් නිර්මාණය කර ඇති Master Mix එකක් අවශ්‍ය වේ.
10 සහ 14 අතර චක්‍ර සංඛ්‍යාව සැකසීමට හේතුව මෙම සීමිත චක්‍ර සංඛ්‍යාව විවිධ ඉලක්ක අතර අහඹු බව සහතික කරයි, ප්‍රමාණාත්මක අණුක තොරතුරු අවශ්‍ය පර්යේෂකයන්ට එය ඉතා වැදගත් වේ.
පූර්ව වර්ධකයෙන් පසුව, අපට cDNA විශාල ප්‍රමාණයක් ලබා ගත හැක, එවිට අපට පසුපස අන්තයේ හඳුනාගැනීමේ සංවේදිතාව බෙහෙවින් වැඩි දියුණු වන අතර, අපට නියැදිය තනුක කර, සිදුවිය හැකි අහඹු දෝෂ ඉවත් කිරීම සඳහා තත්‍ය කාලීන PCR ප්‍රතික්‍රියා කිහිපයක් සිදු කළ හැක.
පසු කාලය: අප්‍රේල්-11-2023